瓊脂糖電泳槽使用全攻略：從制膠到跑膠的關(guān)鍵技巧與常見問題解析

　　以下是天津本生技術(shù)小編對瓊脂糖電泳槽從制膠到跑膠的全流程操作指南及問題解決方案：

　　一、?制膠關(guān)鍵技巧?

　　凝膠濃度選擇?

　　0.7%-1%膠適用于1-20kb大片段DNA，2%膠用于50-1000bp小片段;

　　RNA分析建議使用變性瓊脂糖凝膠(如含甲醛)。

　　緩沖液配置?

　　TAE緩沖液適合快速電泳(大片段分離)，TBE緩沖液分辨率更高(小片段分離);

　　緩沖液需現(xiàn)配現(xiàn)用，重復(fù)使用會導(dǎo)致pH上升、條帶模糊。

　　制膠操作?

　　微波加熱瓊脂糖至透明(避免局部沸騰)，冷卻至60℃再加核酸染料(如GelRed);

　　倒膠時緩慢傾斜模具，避免氣泡產(chǎn)生，梳子垂直插入距底板1mm處。

　　二、?電泳運行優(yōu)化?

　　上樣規(guī)范?

　　DNA與Loading Buffer按4:1混合，上樣量≤孔容積80%(避免溢出);

　　Marker需預(yù)沉降5分鐘再通電，防止條帶歪斜。

　　電泳參數(shù)?

　　電壓設(shè)置：5-10V/cm(膠長度)，>20V/cm易致條帶擴散;

　　溫度控制：常規(guī)DNA電泳<30℃，長片段(>10kb)建議<15℃。

　　緩沖液管理?

　　液面需覆蓋凝膠1-2mm，過低會導(dǎo)致條帶扭曲;

　　鉑金電極需定期用蒸餾水清洗，防止鹽結(jié)晶腐蝕。

　　三、?常見問題解析?

　　問題現(xiàn)象? ?原因分析? ?解決方案?

　　條帶模糊/拖尾 DNA降解、緩沖液陳舊或上樣過量 更換緩沖液，減少上樣量，避免核酸酶污染

　　帶扭曲 電場不均或梳子拔出不規(guī)范 預(yù)電泳5分鐘(低電壓)，垂直緩慢拔梳子

　　無條帶顯示 電極接觸不良或DNA未染色 檢查電極連接，確認染料活性

　　背景熒光雜斑 制膠雜質(zhì)或紫外照射過久 過濾瓊脂糖溶液，縮短紫外觀察時間

　　四、?設(shè)備維護建議?

　　每次使用后需用蒸餾水沖洗槽體及電極，避免緩沖液殘留腐蝕;

　　長期存放時拆卸梳子與模具，防止塑料變形。

　　通過規(guī)范操作與針對性優(yōu)化，可顯著提升電泳結(jié)果的可重復(fù)性。

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　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師。

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